A set of 68 simple sequence repeat (SSR) markers were selected from existing databases (including Medicago, soybean, cowpea and peanut) for the purpose of exploiting the transferability of SSRs across species and/or genera within the legume family. Primers were tested for cross-species and cross-genus fragment amplification with an array of 24 different legume accessions. Nearly one-third (30.78%) of the SSR primers screened generated reproducible and cross-genus amplicons. One hundred and seventeen cross-species polymorphic amplicons were identified and could be used as DNA markers. These polymorphic markers are now being used for characterization and evaluation of our collected and donated legume germ- plasm. The transferability of SSRs, mis-/multiple-primings, homologous/heterologous amplifications, single/multiple-amplicons and application of these amplicons as DNA markers are discussed. The transfer of SSR markers across species or across genera can be a very efficient approach for DNA marker development, especially for minor crops.

OBJECTIVES/GOALS: Whole-genome viral sequencing is vital to inform public health and study evolution. Arboviruses evolve in vectors, reservoir hosts, and humans, and require surveillance at all points. We developed a new rigorous method of sequencing that captures whole viral genomes in field-collected and clinical samples. METHODS/STUDY POPULATION: ClickSeq is a novel method of Next Generation Sequencing (NGS) library synthesis using azido-nucleotides to terminate reverse transcription. The cDNA generated can be ligated to sequencing and indexing primers at room temperature using copper (Cu I) and vitamin C. With this approach, we designed primers located ~250 bp apart along the genomes of the arboviruses Chikungunya 37797, Zika Dakar, Yellow Fever Asibi, Dengue serotype 2, West Nile 385-99, and St. Louis Encephalitis Virus (SLEV) clade II. We tested this method with varying viral titers: lab-infected mosquito pools, field-collected mosquito pools from a Texas West Nile and SLEV outbreak, and patient isolates from a Pakistani CHIKV outbreak. The cDNA was sequenced in the UTMB NGS Core and aligned using bowtie. RESULTS/ANTICIPATED RESULTS: The use of a single protocol to capture whole viral genomes including UTRs for multiple viruses from different sample collection styles is ideal for arboviruses. Primers for multiple viruses were pooled and used to sequence mosquito pools. The Tiled ClickSeq method captured whole viral genomes without the need for host depletion. UTRs were captured even when the viral strain used for primer design differed from the resulting strain. Discreet variants were captured in both the hypervariable nsP3 region and the UTR in the patient isolates from the CHIKV outbreak compared to the 2017 outbreak. Texas WNV and SLEV outbreaks are now defined from the 2020 outbreak and can be further tracked to update public health measures and understand viral evolution. DISCUSSION/SIGNIFICANCE: UTRs impact both human and mosquito fitness, leading to further outbreaks. Tiled ClickSeq aims to capture whole viral genomes with a method and cost that can be implemented by public health researchers to understand disease evolution as it happens to update both public health and basic virology to the effects of evolution on arboviruses.

Antibiotics are among the most common medications prescribed in nursing homes. The annual prevalence of antibiotic use in residents of nursing homes ranges from 47% to 79%, and more than half of antibiotic courses initiated in nursing-home settings are unnecessary or prescribed inappropriately (wrong drug, dose, or duration). Inappropriate antibiotic use is associated with a variety of negative consequences including Clostridioides difficile infection (CDI), adverse drug effects, drug–drug interactions, and antimicrobial resistance. In response to this problem, public health authorities have called for efforts to improve the quality of antibiotic prescribing in nursing homes.

Postprandial glycaemia and insulinaemia are important risk factors for type 2 diabetes. The prevalence of insulin resistance in adolescents is increasing, but it is unknown how adolescent participant characteristics such as BMI, waist circumference, fitness and maturity offset may explain responses to a standard meal. The aim of the present study was to examine how such participant characteristics affect the postprandial glycaemic and insulinaemic responses to an ecologically valid mixed meal. Data from the control trials of three separate randomised, crossover experiments were pooled, resulting in a total of 108 participants (fifty-two boys, fifty-six girls; aged 12·5 (SD 0·6) years; BMI 19·05 (SD 2·66) kg/m2). A fasting blood sample was taken for the calculation of fasting insulin resistance, using the homoeostatic model assessment of insulin resistance (HOMA-IR). Further capillary blood samples were taken before and 30, 60 and 120 min after a standardised lunch, providing 1·5 g/kg body mass of carbohydrate, for the quantification of blood glucose and plasma insulin total AUC (tAUC). Hierarchical multiple linear regression demonstrated significant predictors for plasma insulin tAUC were waist circumference, physical fitness and HOMA-IR (F(3,98) = 36·78, P < 0·001, adjusted R2 = 0·515). The variance in blood glucose tAUC was not significantly explained by the predictors used (F(7,94) = 1·44, P = 0·198). Significant predictors for HOMA-IR were BMI and maturity offset (F(2,102) = 14·06, P < 0·001, adjusted R2 = 0·021). In summary, the key findings of the study are that waist circumference, followed by physical fitness, best explained the insulinaemic response to an ecologically valid standardised meal in adolescents. This has important behavioural consequences because these variables can be modified.

Introduction: For rhythm control of acute atrial flutter (AAFL) in the emergency department (ED), choices include initial drug therapy or initial electrical cardioversion (ECV). We compared the strategies of pharmacological cardioversion followed by ECV if necessary (Drug-Shock), and ECV alone (Shock Only). Methods: We conducted a randomized, blinded, placebo-controlled trial (1:1 allocation) comparing two rhythm control strategies at 11 academic EDs. We included stable adult patients with AAFL, where onset of symptoms was <48 hours. Patients underwent central web-based randomization stratified by site. The Drug-Shock group received an infusion of procainamide (15mg/kg over 30 minutes) followed 30 minutes later, if necessary, by ECV at 200 joules x 3 shocks. The Shock Only group received an infusion of saline followed, if necessary, by ECV x 3 shocks. The primary outcome was conversion to sinus rhythm for ≥30 minutes at any time following onset of infusion. Patients were followed for 14 days. The primary outcome was evaluated on an intention-to-treat basis. Statistical significance was assessed using chi-squared tests and multivariable logistic regression. Results: We randomized 76 patients, and none was lost to follow-up. The Drug-Shock (N = 33) and Shock Only (N = 43) groups were similar for all characteristics including mean age (66.3 vs 63.4 yrs), duration of AAFL (30.1 vs 24.5 hrs), previous AAFL (72.7% vs 69.8%), median CHADS2 score (1 vs 1), and mean initial heart rate (128.9 vs 126.0 bpm). The Drug-Shock and Shock only groups were similar for the primary outcome of conversion (100% vs 93%; absolute difference 7.0%, 95% CI -0.6;14.6; P = 0.25). The multivariable analyses confirmed the similarity of the two strategies (P = 0.19). In the Drug-Shock group 21.2% of patients converted with the infusion. There were no statistically significant differences for time to conversion (84.2 vs 97.6 minutes), total ED length of stay (9.4 vs 7.5 hours), disposition home (100% vs 95.3%), and stroke within 14 days (0 vs 0). Premature discontinuation of infusion (usually for transient hypotension) was more common in the Drug-Shock group (9.1% vs 0.0%) but there were no serious adverse events. Conclusion: Both the Drug-Shock and Shock Only strategies were highly effective and safe in allowing AAFL patients to go home in sinus rhythm. IV procainamide alone was effective in only one fifth of patients, much less than for acute AF.

Introduction: Cases of anaphylaxis in children are often not appropriately managed by caregivers. We aimed to develop and to test the effectiveness of an education tool to help pediatric patients and their families better understand anaphylaxis and its management and to improve current knowledge and treatment guidelines adherence. Methods: The GEAR (Guidelines and Educational programs based on an Anaphylaxis Registry) is an initiative that recruits children with food-induced anaphylaxis who have visited the ED at the Montreal Children's Hospital and at The Children's Clinic located in Montreal, Quebec. The patients and parents, together, were asked to complete six questions related to the triggers, recognition and management of anaphylaxis at the time of presentation to the allergy clinic. Participants were automatically shown a 5-minute animated video addressing the main knowledge gaps related to the causes and management of anaphylaxis. At the end of the video, participants were redirected to same 6 questions to respond again. To test long-term knowledge retention, the questionnaire will be presented again in one year's time. A paired t-test was used to compare the difference between the baseline score and the follow-up score based on percentage of correct answers of the questionnaire. Results: From June to November 2019, 95 pediatric patients with diagnosed food-induced anaphylaxis were recruited. The median patient age was 4.5 years (Interquartile Range (IQR): 1.6–7.4) and half were male (51.6%). The mean questionnaire baseline score was 0.77 (77.0%, standard deviation (sd): 0.16) and the mean questionnaire follow-up score was 0.83 (83.0%, sd: 0.17). There was a significant difference between the follow-up score and baseline score (difference: 0.06, 95% CI: 0.04, 0.09). There were no associations of baseline questionnaire scores and change in scores with age and sex. Conclusion: Our video teaching method was successful in educating patients and their families to better understand anaphylaxis. The next step is to acquire long-term follow up scored to determine retention of knowledge.

Introduction: CAEP recently developed the acute atrial fibrillation (AF) and flutter (AFL) [AAFF] Best Practices Checklist to promote optimal care and guidance on cardioversion and rapid discharge of patients with AAFF. We sought to assess the impact of implementing the Checklist into large Canadian EDs. Methods: We conducted a pragmatic stepped-wedge cluster randomized trial in 11 large Canadian ED sites in five provinces, over 14 months. All hospitals started in the control period (usual care), and then crossed over to the intervention period in random sequence, one hospital per month. We enrolled consecutive, stable patients presenting with AAFF, where symptoms required ED management. Our intervention was informed by qualitative stakeholder interviews to identify perceived barriers and enablers for rapid discharge of AAFF patients. The many interventions included local champions, presentation of the Checklist to physicians in group sessions, an online training module, a smartphone app, and targeted audit and feedback. The primary outcome was length of stay in ED in minutes from time of arrival to time of disposition, and this was analyzed at the individual patient-level using linear mixed effects regression accounting for the stepped-wedge design. We estimated a sample size of 800 patients. Results: We enrolled 844 patients with none lost to follow-up. Those in the control (N = 316) and intervention periods (N = 528) were similar for all characteristics including mean age (61.2 vs 64.2 yrs), duration of AAFF (8.1 vs 7.7 hrs), AF (88.6% vs 82.9%), AFL (11.4% vs 17.1%), and mean initial heart rate (119.6 vs 119.9 bpm). Median lengths of stay for the control and intervention periods respectively were 413.0 vs. 354.0 minutes (P < 0.001). Comparing control to intervention, there was an increase in: use of antiarrhythmic drugs (37.4% vs 47.4%; P < 0.01), electrical cardioversion (45.1% vs 56.8%; P < 0.01), and discharge in sinus rhythm (75.3% vs. 86.7%; P < 0.001). There was a decrease in ED consultations to cardiology and medicine (49.7% vs 41.1%; P < 0.01), but a small but insignificant increase in anticoagulant prescriptions (39.6% vs 46.5%; P = 0.21). Conclusion: This multicenter implementation of the CAEP Best Practices Checklist led to a significant decrease in ED length of stay along with more ED cardioversions, fewer ED consultations, and more discharges in sinus rhythm. Widespread and rigorous adoption of the CAEP Checklist should lead to improved care of AAFF patients in all Canadian EDs.

Introduction: Les patients ayant un retour de circulation spontanée (RCS) durant la phase préhospitalière de leur réanimation suite à un arrêt cardiaque extrahospitalier (ACEH) ont un meilleur taux de survie que ceux n'en ayant pas. La durée des efforts de réanimation avant l'initiation d'un transport ne varie généralement pas en fonction du rythme initial observé. Cette étude vise à comparer la durée des manœuvres de réanimation nécessaire afin de générer la majorité des RCS préhospitaliers et des RCS préhospitaliers menant à une survie en fonction du rythme initial. Methods: La présente étude de cohorte a été réalisée à partir des bases de données collectées de la Corporation d'Urgences-santé dans la région de Montréal entre 2010 et 2015. Les patients avec un ACEH d'origine médicale ont été inclus. Les patients dont l'ACEH était témoigné par les paramédics ont été exclus, tout comme ceux dont le rythme initial était inconnu. Nous avons comparé entre les groupes (rythme défibrillable [RD], activité électrique sans pouls [AESP] et asystolie) les taux de RCS préhospitalier et le temps nécessaires pour obtenir une majorité des RCS préhospitaliers et des RCS préhospitaliers menant à une survie. Results: Un total de 6002 patients (3851 hommes et 2151 femmes) d'un âge moyen de 52 ans ( ±10) ont été inclus dans l’étude, parmi lesquels 563 (9%) ont survécu jusqu’à leur congé hospitalier et 1310 (22%) ont obtenu un RCS préhospitalier. Un total de 1545 (26%) patients avaient un RD, 1654 (28%) une AESP et 2803 (47%) une asystolie. Les patients avec un RD ont obtenu plus fréquemment un RCS préhospitalier et un RCS préhospitalier menant à une survie que les patients avec une AESP qui eux même avaient un meilleur pronostic que ceux avec une asystolie initial (777 patients [55%] vs 385 [23%] vs 148 [5%], p < 0,001; 431 [28%] vs 85 [5%] vs 7 [0,2%], p < 0,001, respectivement). Les RCS survenaient également plus rapidement lorsque le rythme initial était un RD (13 minutes [ ±12] vs 18 [ ±13] vs 25 [ ±12], p < 0,001). Cependant, une période de réanimation plus longue était nécessaire afin d'obtenir 95% des RCS préhospitaliers menant à une survie pour les patients avec un RD (26 minutes vs 21 minutes vs 21 minutes). Conclusion: Les patients avec un rythme initial défibrillable suite à leur ACEH sont à meilleur pronostic. Il serait envisageable de transporter plus rapidement vers l'hôpital les patients avec une AESP ou une asystolie que ceux avec un rythme défibrillable si l'arrêt des manœuvres n'est pas envisagé.

Introduction: For rhythm control of acute atrial fibrillation (AAF) in the emergency department (ED), choices include initial drug therapy or initial electrical cardioversion (ECV). We compared the strategies of pharmacological cardioversion followed by ECV if necessary (Drug-Shock), and ECV alone (Shock Only). Methods: We conducted a randomized, blinded, placebo-controlled trial (1:1 allocation) comparing two rhythm control strategies at 11 academic EDs. We included stable adult patients with AAF, where onset of symptoms was <48 hours. Patients underwent central web-based randomization stratified by site. The Drug-Shock group received an infusion of procainamide (15mg/kg over 30 minutes) followed 30 minutes later, if necessary, by ECV at 200 joules x 3 shocks. The Shock Only group received an infusion of saline followed, if necessary, by ECV x 3 shocks. The primary outcome was conversion to sinus rhythm for ≥30 minutes at any time following onset of infusion. Patients were followed for 14 days. The primary outcome was evaluated on an apriori-specified modified intention-to-treat (MITT) basis excluding patients who never received the study infusion (e.g. spontaneous conversion). Data were analyzed using chi-squared tests and logistic regression. Our target sample size was 374 evaluable patients. Results: Of 395 randomized patients, 18 were excluded from the MITT analysis; none were lost to follow-up. The Drug-Shock (N = 198) and Shock Only (N = 180) groups (total = 378) were similar for all characteristics including mean age (60.0 vs 59.5 yrs), duration of AAF (10.1 vs 10.8 hrs), previous AF (67.2% vs 68.3%), median CHADS2 score (0 vs 0), and mean initial heart rate (119.9 vs 118.0 bpm). More patients converted to normal sinus rhythm in the Drug-Shock group (97.0% vs 92.2%; absolute difference 4.8%, 95% CI 0.2-9.9; P = 0.04). The multivariable analyses confirmed the Drug-Shock strategy superiority (P = 0.04). There were no statistically significant differences for time to conversion (91.4 vs 85.4 minutes), total ED length of stay (7.1 vs 7.7 hours), disposition home (97.0% vs 96.1%), and stroke within 14 days (0 vs 0). Premature discontinuation of infusion was more common in the Drug-Shock group (8.1% vs 0.6%) but there were no serious adverse events. Conclusion: Both the Drug-Shock and Shock Only strategies were highly effective and safe in allowing AAF patients to go home in sinus rhythm. A strategy of initial cardioversion with procainamide was superior to a strategy of immediate ECV.

Introduction: Les patients dont l'arrêt cardiaque extrahospitalier (ACEH) n'a pas été témoigné sont généralement exclus des protocoles de réanimation par circulation extracorporelle puisque le délai avant l'initiation de leur réanimation est inconnu. Il a été proposé que la présence d'un rythme initial défibrillable (RD) est fortement suggestif une très courte période avant l'initiation des manœuvres de réanimation. La présente étude vise à décrire l'association entre la durée avant l'initiation de la réanimation et la présence d'un RD chez des patients souffrant d'un ACEH. Methods: Cette étude de cohorte a été réalisée à partir des bases de données collectées de la Corporation d'Urgences-santé dans la région de Montréal entre 2010 et 2015. Les patients dont l'arrêt était témoigné, mais dont les témoins n'ont pas entamé de manœuvres de réanimation, ont été inclus. Nous avons également inclus les patients dont l'arrêt était témoigné par les paramédics comme groupe contrôle (durée avant l'initiation de la réanimation = 0 minute). Les patients avec un retour de circulation spontanée avant l'arrivée des services préhospitaliers ont été exclus, tout comme ceux dont le rythme initial était inconnu. Nous avons décrit l’évolution de la proportion de chacun des rythmes et construit une régression logistique multivariée ajustant pour les variables sociodémographiques et cliniques pertinentes. Results: Un total de 1751 patients (1173 hommes et 578 femmes) d'un âge moyen de 69 ans (±16) ont été inclus dans l'analyse principale, parmi lesquels 603 (34%) avaient un RD. Un total de 663 autres patients ont vu leur ACEH témoigné directement par les paramédics. Un plus court délai avant l'initiation des manœuvres est associé à la présence d'un RD (rapport de cotes ajusté = 0,97 [intervalle de confiance à 95% 0,94-0,99], p = 0,016). Cependant, cette relation n'est pas linéaire et la proportion de RD ne diminue pas avant notablement jusqu’à ce que 15 minutes s’écoulent avant le début de la réanimation (0 min = 35%, 1-5 min = 37%, 5-10 min = 35%, 10-15 min = 34%, +de 15 min = 16%). Conclusion: Bien que la proportion de patients avec un RD diminue lorsque le délai augmente avant l'initiation des manœuvres, cette relation ne semble pas linéaire. La baisse principale de la proportion de patients avec RD semble se produire suite à la quinzième minute de délai avant le début de la réanimation.

Introduction: La réanimation par circulation extracorporelle (R-CEC) permet potentiellement d'améliorer la survie de patients souffrant d'un arrêt cardiaque extrahospitalier (ACEH) réfractaire aux traitements habituels. Cette technique, se pratiquant généralement en centre hospitalier (CH), doit être réalisée le plus précocement possible. Un transport vers le CH en temps opportun est donc nécessaire. Cette étude vise à décrire la durée nécessaire des manœuvres de réanimation préhospitalières afin d'optimiser le moment du départ vers le CH dans le but d'obtenir un maximum de retour de circulation spontanée (RCS) préhospitalier. Methods: La présente étude de cohorte a été réalisée à partir des bases de données collectées de la Corporation d'Urgences-santé dans la région de Montréal entre 2010 et 2015. Les patients éligibles à une R-CEC selon les critères locaux ont été inclus (<65 ans, rythme initial défibrillable, arrêt témoigné avec réanimation par un témoin). Les patients ayant eu un arrêt devant les paramédics ont été exclus, tout comme ceux avec un RCS avant l'arrivée des services préhospitaliers. Nous avons calculé la sensibilité et la spécificité à différents seuils afin de prédire un RCS préhospitalier et une survie au congé hospitalier. Une courbe ROC a également été construite. Results: Un total de 236 patients (207 hommes et 29 femmes) d'un âge moyen de 52 ans (±10) ont été inclus dans l’étude, parmi lesquels 93 (39%) ont survécu jusqu’à leur congé hospitalier et 136 (58%) ont obtenu un RCS préhospitalier. Le délai moyen avant leur RCS était de 13 minutes (±10). Plus de 50% des survivants avaient eu un RCS moins de 8 minutes après l'initiation des manœuvres de réanimation par les intervenants préhospitaliers, et plus de 90% avant 24 minutes. Plus de 50% de tous les RCS survenaient dans les 10 premières minutes de réanimation et plus de 90% dans les 31 premières minutes. La courbe ROC montrait visuellement que le délai avant le RCS maximisant la sensibilité et la spécificité pour prédire la survie chez ces patients était à 22 minutes (Sensibilité = 90%, spécificité = 78%; aire sous la courbe = 0,89 [intervalle de confiance à 95% 0,84-0,93]). Conclusion: Le départ vers le CH pourrait être considéré pour ces patients entre 8 et 24 minutes après l'initiation des manœuvres. Une période de réanimation de 22 minutes semble être le meilleur compromis à cet égard.

Introduction: Parmi les patients souffrant d'un arrêt cardiaque extrahospitalier (ACEH), ceux ayant un retour de circulation spontanée (RCS) durant la phase préhospitalière de leur réanimation ont un meilleur taux de survie. Il est plausible que les patients ayant un RCS plus précocement durant leur réanimation préhospitalière aient de meilleur taux de survie que les patients ayant un RCS plus tardif. Cette étude visait à décrire l'association entre la survie et la durée de la réanimation par les paramédics avant le RCS préhospitalier. Methods: La présente étude de cohorte a été réalisée à partir des bases de données collectées de la Corporation d'Urgences-santé dans la région de Montréal entre 2010 et 2015. Tous les patients adultes avec un RCS préhospitalier suite à un ACEH d'origine médicale ont été inclus. Les patients ayant eu un arrêt devant les paramédics ont été exclus, tout comme ceux avec un RCS avant l'arrivée des services préhospitaliers. L'association entre la survie et le temps de réanimation avant le RCS a été évaluée à l'aide d'une régression logistique multivariée ajustant pour les variables sociodémographiques et cliniques pertinentes (âge, sexe, rythme initial, heure de l'appel initial, arrêt témoigné, manœuvre par témoin, présence de premiers répondants ou de paramédics de soins avancés, délai avant l'arrivée des intervenants préhospitaliers). Results: Un total de 1194 patients (818 hommes et 376 femmes) d'un âge moyen de 64 ans ( ±17) ont été inclus dans l’étude, parmi lesquels 433 (36%) ont survécu jusqu’à leur congé hospitalier. Le délai moyen avant leur RCS était de 17 minutes ( ±12). Nous avons observé une association indépendante entre la survie au congé hospitalier et le délai avant le RCS préhospitalier (rapport de cotes ajusté = 0,91 [intervalle de confiance à 95% 0,89-0,92], p < 0,001). Plus de 50% des survivants avaient obtenu un RCS moins de 9 minutes après l'initiation des manœuvres de réanimation par les intervenants préhospitaliers, et plus de 95% avant 26 minutes. Aucun (0%) des 17 patients ayant eu un RCS plus de 56 minutes après l'initiation de la réanimation préhospitalière n'a survécu. Conclusion: Un RCS précoce semble être un facteur de bon pronostic parmi les patients souffrant d'un ACEH. La majorité des patients avec un RCS préhospitalier allant survivre à leur hospitalisation ont obtenus leur RCS dans les 9 minutes suivant l'initiation des manœuvres de réanimation.

Indigenous women and children experience some of the most profound health disparities globally. These disparities are grounded in historical and contemporary trauma secondary to colonial atrocities perpetuated by settler society. The health disparities that exist for chronic diseases may have their origins in early-life exposures that Indigenous women and children face. Mechanistically, there is evidence that these adverse exposures epigenetically modify genes associated with cardiometabolic disease risk. Interventions designed to support a resilient pregnancy and first 1000 days of life should abrogate disparities in early-life socioeconomic status. Breastfeeding, prenatal care and early child education are key targets for governments and health care providers to start addressing current health disparities in cardiometabolic diseases among Indigenous youth. Programmes grounded in cultural safety and co-developed with communities have successfully reduced health disparities. More works of this kind are needed to reduce inequities in cardiometabolic diseases among Indigenous women and children worldwide.